PCR检测作为体外诊断领域的核心技术，近年来随着市场需求的更新，为确保在新冠疫情、非洲猪瘟等大规模疫情爆发和管控过程中检测结果的及时、准确，IVD企业纷纷开始全预混产品的开发，各大原料厂家也及时在原料端进行迭代更新，可全预混试剂严重的非特异扩增现象依旧困扰着大家，成为无法彻底解决的难题。如何解决全预混试剂的非扩增特异性问题已然成为当下分子生物学领域的一大挑战。目前热启动DNA聚合酶的封闭效果只有90%-95%，一旦把引物探针和酶以及buffer全部预混，未封闭住的酶活会使体系产生大量的非特异性扩增。为弥补热启动酶这一缺陷，彻底解决非特异性扩增问题，奥利芙生物隆重推出革命性新产品：热启动dNTP—“Thermal-initiated dNTP Mix”！
产品介绍

Thermal-initiated dNTP Mix是由奥利芙生物公司研发的革命性创新产品。它是一种经过特殊化学修饰的脱氧核糖核苷酸，正常情况下，Thermal-initiated dNTP Mix无法参与磷酸二酯键的生成，只有经过热激之后，Thermal-initiated dNTP Mix才会变成普通dNTP参与PCR扩增。该产品能够显著减少由非特异退火或引物二聚体引起的非特异扩增。

Thermal-initiated dNTP Mix在 -20°C 下可稳定保存至少一年。它能兼容各种热启动 DNA 聚合酶，适用于普通 PCR、快速热循环 PCR、多重 PCR 和实时荧光定量 PCR 等多种 PCR 系统，配合热启动DNA聚合酶一起使用，可以最大限度降低非特异性扩增。

产品特点

1.常温下封闭效果好

为了验证Thermal-initiated dNTP Mix的封闭效果，我们选择在恒温PCR（lamp）体系进行封闭效果验证，整个PCR过程中温度不超过60℃。

当全预混体系放置3天，结果显示与普通dNTP相比 Thermal-initiated dNTP Mix表现出完全的封闭性，无信号检出（图1-A，未加热蓝色框）。
把Thermal-initiated dNTP 组分单独提前95℃热激30s后，其扩增效果与普通dNTP相当（图1-B）。

图1-A 恒温PCR体系下，Thermal-initiated dNTP Mix 封闭效果图

图1-B Thermal-initiated dNTP单独提前热激活之后，热启动dNTP与普通dNTP在lamp体系中的扩增效率对比

2.热激后释放效率高

在变温PCR条件下，Thermal-initiated dNTPMix无需单独加热，在正常的PCR程序中就可以完全释放。Thermal-initiated dNTP Mix在释放速度快的基础上，其扩增效率仍与dNTP一致（如图2A）等温lamp条件下，Thermal-initiated dNTP Mix组分单独加热30s，其封闭效果即可快速解除，并且扩增效率与dNTP几乎一致（如图2B）。

图2 变温PCR体系下，Thermal-initiated dNTP Mix 与普通dNTP扩增效果对比图

3.有效减少非特异性扩增的产生

为了探究Thermal-initiated dNTP Mix对于减少非特异性扩增的效果，我们进行了毛细管电泳实验。在STR超多重体系下，我们将Thermal-initiated dNTP Mix和普通dNTP产品做对比。结果显示，热启动DNA聚合酶与普通dNTP产生大量非特异扩增(图4下红色方框内)，相比之下，Thermal-initiated dNTP Mix 与热启动DNA聚合酶共同作用显著减少非特异性扩增(图4 红框区域)。