PCR


  PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,体系中加入dNTP、Mg2+以及延伸因子、扩增增强因子,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程,能快速特异地在体外扩增任何目的DNA,目前PCR技术已被广泛应用于与分子生物学相关的各个领域。
  PCR反应体系的主要成分包括:模板 、Taq DNA 聚合酶、引物、dNTP和反应buffer等。其中dNTP是deoxy-ribonucleoside triphosphate(脱氧核糖核苷三磷酸)的缩写,是包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,dUTP等在内的统称,“d”指deoxidize,deoxy-,脱氧;“N”代指含氮碱基,代表A、T、G、C、U等中的一种;TP指triphosphate,三磷酸盐。dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系,在PCR反应中,4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制),如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低),就会引起错配。dNTP的浓度应为50-200μmol/L,浓度过低会降低PCR产物的产量;dNTP能与Mg2+结合,因此dNTP浓度过高会使游离的Mg2+浓度降低,进而影响PCR扩增。
  如何挑选高质量的dNTP对于PCR反应至关重要,1. dNTP的纯度要高,2.dNTP的冻融稳定性要好,3.dNTP的批间稳定性要强,4.dNTP中无人或者细菌基因组残留,5.dNTP中不应有DNase、RNase、切割酶等残留。

 

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